超微细胞化学的原理与技术_周竹青编著_9787030303073

　　《全国高等农林院校研究生教材·超微细胞化学的原理与技术》是在华中农业大学研究生课程“生物电镜技术与超微细胞化学”和生物学同家理科基地班课程“细胞化学”讲义的基础上编写而成的。分为上、下两篇，共10章。上篇系统介绍了超微细胞化学的常用仪器和样品制备技术，包括透射电子显微镜、扫捕电子显微镜、扫捕隧道显微镜、原子力显微镜和激光共聚焦显微镜等的工作原理和样品制备技术；另外，还对分析电镜技术、冷冻电镜技术、冷冻电镜三维重构技术等作了简单说明。下篇详细介绍了超微细胞化学的原理和技术，同时举例说明了相应技术在农业和生命科学研究中的应用，主要包括生物大分子及离子的常规定位技术、免疫电镜细胞化学技术、电镜放射自显影技术、显微细胞化学概述、超微和显微细胞化学在分子生物学中的应用等内容。

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　　一、细胞化学的定义
　　细胞化学是研究细胞的化学成分及其在细胞活动中的变化和定位的科学。它在不破坏细胞形态结构的情况下，用生化和物理技术对各种组分做定性和定量分析，研究其动态变化，了解细胞代谢过程中各种细胞组分的作用。而组织化学是指以常用的组织化学技术对细胞内主要化学成分和活性的一般性的研究。细胞化学和组织化学的发展是密不可分的，它们都建立在细胞学、组织学及生物化学的基础上。对细胞中的不同组分进行区别着色是细胞化学中最基础的工作。
　　二、细胞化学的发展
　　19世纪初，法国植物学家拉斯帕伊在研究禾本科植物受精作用时，首次发现了淀粉的碘反应。此后他还建立了蛋白质的黄色反应、硫酸对于糖醛及蛋白质醛基的反应等鉴定方法，因此被认为是组织化学的创始人。
　　1867年，珀尔斯用普鲁士蓝显示细胞中的铁质。1868年，克文克用黄色硫化胺溶液与细胞中的铁质反应生成黑色的硫化亚铁，进行显色反应鉴定细胞中的铁质。1844年，米利翁叙述了蛋白质反应中一种测定酪氨酸的方法。1862年，本克首次将苯胺作为组织化学染料应用于生物组织结构的研究，这是组织学方法上的一次革命。在1868年和1872年，克莱布斯和施特鲁韦分别通过实验显示出组织中酶的存在。1895年，埃尔利希用“纳笛”反应首次显示细胞色素氧化酶。
　　20世纪40年代，随着细胞形态学和生物化学的发展，组织化学、细胞化学迅速发展。1936年，比利时组织化学家利松的《动物组织化学》一书总结了组织化学的优缺点及发展方向，把组织化学推向高潮。
　　当前，发展比较快的是定量细胞化学，其目的是对细胞、细胞组分和细胞产物在其原位上和生活情况下进行定量化学分析，主要包括细胞光度学和原位定量测量两个方面。细胞光度学是对细胞内某些化学物质在光学上的数量进行分析，最常用的方法有吸收量度法、荧光测定法、干涉量度法、反射量度法等。原位定量测量包括对切片厚度的测定、对一个特定细胞化学反应区域的定量测量，以及对放射自显影颗粒的计数和自动影像分析。定量细胞化学虽是细胞化学发展的主要方向，但仍有不少困难。有关仪器方面的问题已逐渐得到解决，但在固定细胞、反应的化学计算方法和反应产物的弥散等方面仍存在不少困难。
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