《基础医学综合实验指导》是针对基础医学综合实验课程专门编写的教材。本教材分为概述、实验、仪器、软件及网络应用四个部分。概述部分介绍了该课程开设的方式和要求；实验部分综合了生物化学、组织病理学、分子生物学、细胞生物学以及免疫学常见的实验内容；仪器部分介绍了上述实验常用仪器的使用方法；软件及网络应用部分则简要介绍了常见的生物软件和网站及其在基础医学研究中的应用。
本教材内容新颖，综合了不同科研领域常见的生物学实验技术，实用性强。注重培养学生实验技术水平、独立思考的能力以及创新能力。本教材可供全国高等院校基础医学专业及相关学科的学生和科研人员使用和参考。
清华大学医学院与美国*医学院联袂培养,培养科研与临床能力俱强的医学高端人才!本教材就是探索的阶段性成果!
基础医学综合实验课程是为了满足清华大学医学院八年制医学实验班学生第四、五学年海外科研训练的需求而开设的预备课程。《基础医学综合实验指导》是针对基础医学综合实验课程专门编写的教材。本教材分为绪论、实验、仪器、软件及网络应用四个部分。概述部分介绍了该课程开设的方式和要求；实验部分综合了生物化学、组织病理学、分子生物学、细胞生物学以及免疫学常见的实验内容；仪器部分介绍了上述实验常用仪器的使用方法；软件及网络应用部分则简要介绍了常见的生物学软件和网站及其在基础医学研究中的应用。
理论上，即将进入大学三年级的医学生，对上述各门学科知识和实验技巧已经有了初步了解，但是缺少整合和具体应用的实际操作能力。本教材参考了《分子克隆》《细胞实验指南》《精编分子生物学实验指南》等诸多资料，将实验内容化繁为简，深入浅出地加以说明，便于学生理解、掌握相关知识和技能。
基础医学综合实验课程已开设四年，在教学工作中，我们得到了吴励、刘晓玲、吴宁、李雪和吴婧娇等老师的大力支持；博士生助教吴俊玉、何智敏、杨柳、丁莉丹等同学在实验操作中给予了学生具体的实验指导和帮助；医学实验班的学生对实验具体操作内容提出了宝贵的修改意见。同时，在文献检索方面，清华大学图书馆任平与任奕老师也为我们提供了良好的教学资源。由于实验在具体的操作方法、软件应用、仪器使用等方面并没有完全固定的要求，我们尽量本着实用、简单明了的原则编写。鉴于我们的经验有限，有不足之处还望同行及同学们多提宝贵意见和建议，以利于我们今后进一步修正和完善本教材。
本教材内容新颖，综合了不同科研领域常见的生物学实验技术，实用性强。注重培养学生实验技术水平、独立思考的能力以及创新能力，本教材可供全国高等院校基础医学、生物学、临床医学专业及相关学科的学生使用，也可供相关科研人员参考。
王大亮2017年7月于清华园
王大亮，清华大学医学院副教授,是清华大学医学院组织学课程主讲教师，有7年临床病理工作经验，获首都医科大学病理学硕士，日本东京大学分子生物学博士学位，在译著《表观遗传学》的出版工作中，承担主要翻译及校稿工作。获得清华大学2014年教学成果奖一等奖。发表20余篇肿瘤病理方面的论文于Cell Research，JCB，JBC等杂志。
第 1章 绪论 1
第１节 基础医学综合实验概述 1
第 2章 实验内容 3
第 1节 生物化学实验 3
实验 1 动物组织蛋白质的提取 3
实验 2 蛋白质的定量（ BCA法） 5
实验 3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 7
实验 4 蛋白质印迹法（ Western blot）12
实验 5 真核细胞核质分离 16
第 2节 组织病理学实验 18
实验 6 石蜡组织切片制备技术 18
实验 7 冰冻组织切片制备技术 22
第 3节 分子生物学实验 25
实验 8 提取组织或细胞总 RNA 25
实验 9 反转录 cDNA合成 28
实验 10 聚合酶链式反应 30
实验 11 真核表达载体的构建 34
实验 12 融合蛋白的原核表达与纯化 42
实验 13 CRISPR-Cas 9基因编辑实验 47
实验 14 Southern印迹杂交 54
第 4节 细胞生物学实验 59
实验 15 细胞传代培养 59
实验 16 细胞转染技术 62
实验 17 稳定细胞系的建立 64
实验 18 流式细胞仪测定细胞周期 66
实验 19 MTT法测定细胞增殖 68
第 5节 免疫学实验 70
实验 20 免疫荧光染色 70
实验 21 免疫组织化学实验 72
第 3章 常见实验室仪器使用指南 75
第 1节 多功能酶标检测仪 75
第 2节 Western blot垂直电泳槽 77
第 3节 Western垂直转印仪 80
第 4节 化学发光成像仪 82
第 5节 石蜡切片机 84
第 6节 冰冻切片机 86
第 7节 微量离心机 88
第 8节 PCR仪89
第 9节 凝胶成像系统 91
第 10节 琼脂糖水平电泳槽 92
第 11节 超声破碎仪 93
第 12节 生物安全柜 95
第 13节 大冷冻离心机 97
第 14节 倒置显微镜 99
第 15节 分光光度计 100
第 16节 流式细胞仪 103
第 17节 正置生物显微镜 107
第 18节 激光扫描共聚焦显微镜 109
第 4章 常见生物学软件及网站在实验中的应用 114
第 1节 NCBI在基因序列查找与比对中的应用 114
第 2节 Primer Premier 5设计引物使用说明 121
第 3节 医学与生命科学数据库概览 129
第 4节 文献管理工具 Endnote Web简易教程 138
思考题参考答案 144
参考文献 157
索引 158
第 1节 多功能酶标检测仪
【仪器名称】酶标仪。
【仪器用途】 MTT测定，用 BCA法测定蛋白质浓度。
【仪器简介】
酶标仪（图 3-1-1）阅读速度快，软件功能强大，预装有校验规程，内置打印机，体积小巧，具有多语言界面（英文、日文、中文和俄文），能单独使用内置软件或者通过 Microplate Manager软件和 PC或 Mac联机使用。 iMark酶标仪的波长范围是 400～750nm，宽波长范围适合不同的应用领域，易于操作的 8位滤光片轮，可以满足多种应用需要，如使用显色底物的 ELISA反应、蛋白浓度测定（ Bradford和 Lowry法）以及 DNA浓度定量测定等。 iMark酶标仪是电动进样门，具有速度可调的板震荡功能，在快速读板模式下，只需要 6s就可读完全部 96孔板或者 10s就可完成双波长检测。
图 3-1-1 酶标仪外观
【操作规程】
1．MTT测定
（1）打开仪器电源（图 3-1-2），待仪器初始化后，输入密码“ 0000”，按 Enter键，进入主界面，仪器预热 10min。
（2）选择需要的波长：在主界面（参数界面），按“ Memory Recall（图 3-1-3）→程序 →
后盖开盖按钮后盖
电源开关显示屏键盘 打印纸出口
图 3-1-2 酶标仪结构说酶标板仓仓门 明图 3-1-3 酶标仪面板
终点法 → 2（单波长 OD490）”。
（3）选择完波长后，放入 96孔板（取下 96板上盖），按“ START/STOP”键进行读板，数据自动打印或连接电脑即可获得。
（4）结束后取出 96孔板，关闭仪器电源。
2．BCA浓度测定
（1）打开仪器电源，待仪器初始化后，输入密码“ 0000”，按 Enter键，进入主界面，仪器预热 10min。
（2）选择需要的波长：在主界面（参数界面），按“ Memory Recall →程序 →终点法 → 3（单波长 OD570）”（BCA检测波长为 562nm）。
（3）选择完波长后，放入 96孔板（取下 96板上盖），按 START/STOP键进行读板，数据自动打印或连接计算机即可获得。
（4）结束后取出 96孔板，关闭仪器电源。
【注意事项】
（1）该仪器内置 4个波长的滤光片，分别是 OD450、OD490、OD570、OD630。可以根据具体需要设定单波长测定或者双波长测定。
（2）每次测定前要提前打开仪器电源，将仪器预热 10min以上。
（3）放入 96孔板时，务必将 96孔板的盖子拿掉。
……
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